La
técnica de hibridación por medio del microarray hacia S.pneumoniae
consta de 3482 sondas de oligonucleótidos 70-mer de los genomas de 3
cepas de neumococo (TIGR4, R6 y G54), así como 10 y 500 amplicones de
oligonucleótidos (70-mers) que sirvieron controles negativos. Todas las
sondas fueron alineadas en contra de la HG19 del genoma humano
utilizando BLASTN y no se obtuvieron resultados.
Se
imprimieron sondas 5X en el portaobjetos de aminosilane, 2μ de los ARN
totales que se comparaban eran transcriptasa inversa descrito en cDNA de
cadena sencilla utilizando (200U sobrescrito II transcriptasa inversa,
6μ Grandom hexámeros, 1X tampón de primera cadena, Ditiotreitol 10 mM
(DTT), 0,5 mM dATP, 0,5 mM dCTP, dGTP 0,5 mM, 0,3 mM dTTP y 0,2mM de
nucleótido modificado-aminoallyl) (Invitrogen).
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